Определение группы крови
В 1901 году выдающийся ученый Карл Ландштейнер открыл группы крови и заложил основы современной трансфузиологии. Исследователь выявил три группы на основании различных вариантов реакции агглютинации эритроцитов и сывороток крови. Материал для исследования был взят у сотрудников собственной лаборатории. Ученики Ландштейнера Декастелло и Стюрли несколькими годами позже открыли четвертую группу, но посчитали ее сомнительной и исключили из результатов исследований. В 1906 году психиатр из Праги Ян Янский подтвердил существование группы AB (IV). Публикация исследования в местном издании оказалась практически незамеченной. В 1910 году после повторного обнаружения четвертой группы Моссом Ян Янский был вынужден доказывать первенство открытия. Чешский ученый предложил цифровое обозначение групп крови: I, II, III, IV.
В трансфузиологии группами крови называют различные сочетания антигенов эритроцитов. Антигены являются генетическими признаками: наследуются от родителей и остаются неизменными на протяжении жизни. В 1980 году Международное сообщество переливания крови разработало числовую терминологию для антигенов эритроцитов. Выделены 23 системы группы крови, включающие 194 антигена. Нумерация в большинстве случаев соответствует порядку обнаружения. Входящие в каждую из 23 систем антигены кодируются шестизначным номером: первые три цифры являются номером системы, оставшиеся три – указывают на специфичность антигена внутри системы.
| № системы | Наименование | Обозначение | Наименование генов | Хромосомная локализация |
|---|---|---|---|---|
| 001 | AB0 | AB0 | AB0 | 9q34.1—q34.2 |
| 002 | MNS | MNS | GYPA, GYPB, GYPE | 4q28—q31 |
| 003 | P | P1 | P1 | 22q11.2—qter |
| 004 | Rh | RH | RHD, RHCE | 1p36.2—p34 |
| 005 | Lutheran | LU | LU | 19q12—q13 |
| 006 | Kell | KEL | KEL | 7q33 |
| 007 | Lewis | LE | FUT3 | 19p33 |
| 008 | Duffy | FY | FY | 1q22—q23 |
| 009 | Kidd | JK | JK | 18q11—q12 |
| 010 | Diego | DI | AE1 | 17q12—q21 |
| 011 | Yt | YT | ACHE | 7q22 |
| 012 | Xg | XG | XG | Xp22.32 |
| 013 | Scianna | SC | SC | 1p36.2—p22 |
| 014 | Dombrock | DO | DO | неизвестна |
| 015 | Colton | CO | AQP1 | 7p14 |
| 016 | Landsteiner-Wiener | LW | LW | 19p13.2—cen |
| 017 | Chido/Rogers | CH/RG | C4A, C4B | 6p21.3 |
| 018 | Hh | H | FUT1 | 19q13 |
| 019 | Kx | XK | XK | Xp21.1 |
| 020 | Gerbich | GE | GYPC | 2q14—q21 |
| 021 | Cromer | CROM | DAF | 1q32 |
| 022 | Knops | KN | CR1 | 1q32 |
| 023 | Indian | IN | CD44 | 11p13 |
Система группы крови AB0
Групповая принадлежность по системе AB0
По мере движения с запада на восток Евразии частота обнаружения антигена A падает, а антигена B возрастает. Антиген 0 редко встречается в Азии, но имеет широкое распространение у коренных народов Южной Америки, Полинезии и Австралии. Причина – эпидемии инфекционных заболеваний.
Результат типирования крови записывают в историю болезни или в карту донора. Врач-трансфузиолог указывает дату и ставит подпись.
В отдельных случаях во время типирования наблюдается слабовыраженная агглютинация эритроцитов. Недостаточно выраженная реакция объясняется наличием слабых вариантов антигенов A и B. Наибольшее клиническое значение представляют подгруппы A1 и A2. Впервые слабые варианты были обнаружены в 1911 году учеными Dungern и Hirszeld. Позднее в 1930 году Landsteiner и Levine предложили названия подгруппы – A1 и A2. A2 встречается до 20 % в группе A и до 35 % в группе AB. Сыворотка лиц из образцов крови A2 может содержать анти-A1-антитела: в 2 % случаев в группе A2 и в 30 % в A2B. Антитела анти-A1 представляют опасность ввиду агглютинации эритроцитов группы A.
Методика определения групп крови A2 и A2B
Частота выявления эритроцитов A2 существенно варьируется в зависимости от применяемых реагентов. Приводим сравнение результатов исследования при использовании различных методик типирования групп крови A2 и A2B.
| Число проанализированных образцов | Группа крови A (II) | Группа крови AB (IV) | ||
|---|---|---|---|---|
| Число проанализированных образцов | Группа A2 (II) в % | Число проанализированных образцов | Группа A2B (IV) в % | |
| Анти-A1 (лектин, фитогемагглютинин) | 1592 | 14,7 | 357 | 23,5 |
| Цоликлоны: анти-A, анти-AB | 3599 | 2,1* | 357 | 7,03* |
| Цоликлон анти-А — слабый | 3587 | 4,5* | 357 | 11,2* |
| Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки | 1592 | 17,4 | 344 | 34,2 |
Примечание: * — агглютинация выражена слабо, присутствуют мелкие агглютинаты на розовом фоне.
Наибольшую точность исследования обеспечивает Анти-A1 (лектин, фитогемагглютинин). Тест рекомендован для выявления подгрупп антигена A у детей младше двух лет. Причина – физиологическая незрелость эритроцитов новорожденных, влекущая ошибочные результаты исследования со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками.
В 1930 году Landsteiner и Levine обнаружили подтип Aint: промежуточный вариант между A1 и A2. Данный антиген характерен для негроидов и достигает 8,5 % у лиц с группой крови A. У европеоидов Aint наблюдался лишь у 1 % людей со второй группой крови. В крайне редких случаях у человека отсутствуют все антигены системы AB0. Фенотип «Бомбей» обусловлен генотипом hh. При отсутствии антигена H у лиц данной категории обнаруживаются анти-A и анти-B антитела.
Методика определения групп крови
Алгоритм выявления группы крови гемагглютинирующими сыворотоками
Для определения группы крови AB0 прямым методом используют две серии стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Подготовьте две серии сывороток трех групп с титром 1:32 или выше. Для забора каждой сыворотки используйте отдельную маркированную пипетку. Подготовьте сыворотку AB(IV) для контроля.
В последнем случае следует удостовериться в отсутствии неспецифической реакции: нанесите на планшет 2 – 3 капли соответствующей группе AB(IV) сыворотки и добавьте одну каплю анализируемых эритроцитов. Перемешайте жидкости и оцените результат спустя пять минут. Отсутствие агглютинации свидетельствует о принадлежности к группе AB(IV), наличие – признак неспецифической реакции. В этом случае, а также при слабовыраженной агглютинации повторите исследование с другими сериями сывороток.
Техника определения группы крови цоликлонами
Моноклональные антитела к антигенам эритроцитов пришли на смену изогемагглютинирующих сывороток. Для каждого типирования достаточно одной серии реагентов анти-A, анти-B, анти-AB. Внедрение моноклональных реагентов позволило значительно упростить и стандартизировать методику типирования по системе AB0. Приводим краткое пошаговое руководство проведения исследования на планшете.
Обычно реакция обнаруживается уже в первые секунды после смешивания. При этом слабые варианты антигенов A и B могут давать более позднюю агглютинацию.
Непрямой метод типирования: алгоритм действий
Методика определения основана на взаимодействии эритроцитов от предварительно типированных лиц групп 0, A, B или смеси эритроцитов от нескольких одногруппных доноров с изогемагглютининами α и β в исследуемой сыворотке.
При работе с каждым типирующим реагентом используйте сухие чистые пипетки. Промывание палочек для перемешивания и пипеток осуществляйте в 0,9 % растворе NaCl.
Заключение о групповой принадлежности
| Результаты анализа плазмы со стандартными эритроцитами | Групповая принадлежность | ||
|---|---|---|---|
| 0(I) | A(II) | B(III) | |
| — | + | + | 0(I) |
| — | — | + | A(II) |
| — | + | — | B(III) |
| — | — | — | AB(IV) |
Система Резус
Levine и Stetson обнаружили антигены системы Резус в 1939 году. Ученые изучали причины развития гемолитических реакций у рожениц при трансфузиях женщинам идентичных по системам AB0, MN и P. эритроцитов мужей. Годом позже Landsteiner и Wiener продуцировали выработку антител посредством иммунизации кроликов эритроцитами обезьян макака-резус. Антитела получили название анти-RH антитела. Полученные агглютинины вступали в реакцию агглютинации с эритроцитами макак-резус и с эритроцитами 85 % граждан Нью-Йорка белой расы. Вызвавший образование антител антиген получил название RH-фактор (D-фактор).
В редких случаях эритроциты людей не содержат ни одного антигена резус. Фенотип обозначают Rhnull. Ген Xro в этом случае представлен в гомозиготной форме и подавляет продуцирование всех антигенов. Обладатели фенотипа Rhnull не проявляют агглютиногеной активности, но имеют возможность передавать антигены по наследству.
Среди европейцев частота резус-положительных по антигену D лиц составляет 85 %. На мембране красных кровяных телец обычно расположено около 10 000 – 30 000 молекул D. При этом существуют два особых типа D-положительных лиц: D u (слабый) и D partial (частичный). Иммунная система D u и D partial способна вырабатывать анти-D-антитела.
Слабый антиген встречается у 1,5 % резус-положительных лиц и характеризуется низким числом (100 – 500) молекул D на мембране. Является иммуногенным для резус-отрицательных лиц. При этом переливание D-положительных эритроцитов больным со слабым D может вызвать сенсибилизацию кровяных телец донора. Эритроциты с D u слабо агглютинируются или совсем не вступают в прямую реакцию агглютинации с полными анти-резус антителами. Определение резус-принадлежности производят в непрямом антиглобулиновом тесте. Носителей D u считают резус-положительными донорами и резус-отрицательными реципиентами.
Антитела против антигенов резус являются иммунными. Возникают вследствие изосенсибилизации. Специфичность определяется спровоцировавшими образование антител антигенами. Выделяют полные и неполные антитела.
Полные являются IgM антителами. Отличаются большим молекулярным весом, обнаруживаются реже по сравнению с неполными антителами. Способны агглютинировать резус-положительные эритроциты. Имеют меньшее значение при трансфузиях.
Неполные преимущественно относятся к классу IgG. Закрепляются на поверхности резус-положительных эритроцитов без образования агглютинатов. Склеивание кровяных телец осуществляется при наличии коллоидных растворов и протеолитических ферментов или после обработки антиглобулиновой сывороткой. Обладают меньшим в сравнении с полными антителами молекулярным весом. Способны проходить через плаценту. Во время сенсибилизации сперва продуцируются полные антитела, далее в большей мере вырабатываются неполные (иммуноглобулины IgG) антитела.
Техника выявления резус-фактора с использованием цоликлона Анти-D-Супер
В случае наступления реакции кровь оценивается как резус-положительная (Rh+), при отсутствии реакции – как резус-отрицательная (Rh-). При отрицательной либо слабо выраженной агглютинации необходимо повторно провести исследование с неполными анти-D IgG антителами с целью выявления слабого или частичного антигена D.
Методика определения резус-фактора D u в пробирочном тесте
Параллельно с анализом выполняют постановку трех контрольных проб: реагента цоликлон Анти-D (анти-D IgG) со стандартными резус-положительными и резус-отрицательными эритроцитами, анализируемых эритроцитов с раствором желатина без диагностикума анти-D IgG.
Отсутствие результатов реакции с анти-D IgM и выраженная агглютинация с анти-D IgG свидетельствуют об обнаружении слабых форм антигена D. При слабо выраженной агглютинации следует повторить исследование в непрямой пробе Кумбса.
Определение резус-принадлежности стандартным универсальным реагентом
Стандартный реагент антирезус Rh0D содержит поликлональные неполные анти-D-антитела. Параллельно с анализом образца осуществляется контрольное исследование реагента Rh0D со стандартными резус-положительными (одногруппными или группы 0) и резус-отрицательными (одногруппными) эритроцитами.
Результат считается достоверным только после проверки контрольных образцов: наступлении реакции со стандартными резус-положительными и отсутствии реакции – с резус-отрицательными эритроцитами.
Информацию о пошаговой постановке непрямого теста Кумбса с использованием неполных анти-D-антител читайте в разделе сайта «Реакция Кумбса».
Чем определяют резус фактор
Rh, Rh type, Rh typing, Rh-factor, rhesus factor.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Как правильно подготовиться к исследованию?
Общая информация об исследовании
Резус-фактор – это белок, находящийся на поверхности эритроцитов у некоторых людей. Кровь тех, у кого он есть, называют резус-положительной, у кого нет – резус-отрицательной. Наличие или отсутствие этого белка является индивидуальной особенностью, а не патологией. Положительный резус-фактор встречается у 85 % людей, соответственно, отрицательный – у 15 %.
Особое значение резус-фактор имеет во время беременности. Если у матери положительный резус, то ее кровь будет в любом случае совместима с кровью ребенка, если отрицательный – возможны варианты: в том случае, когда у отца ребенка тоже отрицательный резус-фактор, кровь матери будет совместима с кровью плода, потому что и ребенок унаследует отрицательный резус, когда же у отца положительный резус-фактор, а у матери отрицательный, с вероятностью в 50 % может возникнуть несовместимость крови матери и ребенка – резус-конфликт, который грозит осложнениями.
Происходит это следующим образом: когда кровь плода попадает в кровоток матери, на его положительный резус в ее организме начинают вырабатываться антитела, так как белки на молекулах эритроцитов воспринимаются организмом матери как нечто чужеродное. Это не опасно для женщины, однако антитела через плаценту проникают в кровоток плода, что грозит ему негативными последствиями: антитела «приклеиваются» к эритроцитам плода и могут вызывать их слипание. Этот процесс называется гемолизом. Гемолиз во время беременности может привести к нарушениям развития плода и в некоторых случаях к выкидышу, а после рождения – к так называемой гемолитической желтухе новорождённых, при которой в крови младенца разрушается значительное количество эритроцитов. При этом кожа новорождённого желтеет, так как продукты распада эритроцитов окрашены именно в желтый цвет. Чаще всего поражается головной мозг, может развиться водянка. В тяжелых случаях младенцу требуется переливание крови.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Что означают результаты?
Если у женщины резус-отрицательная кровь и положительный результат на антирезусные антитела, необходимо определение группы крови и резус-фактора отца ребенка. Если у отца отрицательный резус-фактор, дальнейшего обследования не требуется, если положительный – проводится дальнейшее наблюдение за динамикой уровня антирезусных антител в крови матери. При его повышении следует принять своевременное решение о терапии.
Кто назначает исследование?
Акушер-гинеколог, врач-терапевт, врач общей практики, гематолог, трансфузиолог, хирург.
Как узнать резус фактор плода
Статья опубликована: 2018-03-30
Рейтинг: 5 из 5
Под понятием «резус фактор» подразумевают белок, который покрывает поверхность эритроцитов. Если он отсутствует, значит, данный показатель является отрицательным. Этот параметр обязательно учитывается при беременности, поскольку его разное значение у женщины и плода может спровоцировать резус-конфликт. Поэтому вопрос о том, как определить резус фактор у ребенка до рождения с высокой точностью, является жизненно важным.
Для чего это необходимо? Возникновение такого конфликта чревато самыми неприятными последствиями. Это может вызвать гемолитическую болезнь, быть гибель плода или рождение ребенка с различными патологиями. Формирование резуса у плода происходит на восьмой неделе беременности, именно в этот период и может возникнуть опасная ситуация.
Поэтому, во время беременности обязательно проводится анализ на определения резус-фактора. Это поможет в дальнейшем контролировать ситуацию, по количеству выявленных антител следить за возможным развитием конфликта и своевременно назначить терапию. Точная диагностика и своевременно принятые меры позволят благополучно выносить и родить абсолютно здорового ребенка.
Как определить резус фактор крови у ребенка
До недавнего времени анализ проводился с применением инвазивных методик. Чтобы узнать резус фактор крови у плода, проводили процедуру кордоцентеза или исследовали амниотическую жидкость. Для этого производили забор материала из пуповины или околоплодных вод путем проникновения в полости. Такие манипуляции сопряжены с определенным риском, вероятность прерывания беременности достигает до 3%.
Поэтому инвазивные исследования назначали только при достижении определенного уровня антител. Несмотря на всю сложность, данная методика не обеспечивала необходимой точности результата.
На сегодняшний день существует безопасная и надежная альтернатива инвазивным методам исследования — это неинвазивный пренатальный ДНК тест. Она позволяет безо всяких рисков для плода и будущей мамы провести необходимые анализы и получить точный результат.
Как узнать резус фактор ребенка
Современные технологии позволяют проводить высокоточные молекулярно-генетические исследования без вмешательства в полость матки. Как узнать резус фактор крови ребенка самым безопасным и точным способом? На первых сроках беременности в крови женщины уже присутствуют фетальные ДНК, доля которых может составлять до 5% от общего количества.
Путем лабораторного анализа молекул ДНК плода устанавливается наличие или отсутствие гена RhD. Если он обнаруживается, значит, показатель малыша – положительный. Такое исследование получило название «ПЦР» — полимеразная цепная реакция. Материал для его проведения – венозная кровь будущей мамы.
Начиная с восьмой недели беременности, когда необходимые признаки сформировались на клеточном уровне, проведение ПЦР позволит абсолютно точно установить пол, наличие гена RhD и возможные наследственные заболевания.
Как определить резус фактор крови у ребенка в лаборатории ДТЛ
Молекулярно-генетический Центр «ДТЛ» специализируется на проведении современных исследований, основанных на последних научных достижениях. Наличие специального оборудования, штата высококлассных опытных специалистов позволяет проводить самые точные и результативные анализы.
Мы имеем большой опыт по проведению безопасных неинвазивных исследований для определения различных состояний плода. Все, что требуется от будущей мамы – сдать анализ крови. Сделать это можно непосредственно в нашем Центре или его представительствах в других городах. Для получения детальной информации и бесплатной консультации – предлагаем заказать обратный звонок.
Определение резус-фактора экспресс-методом
Приводим пошаговое описание методики определения резус-фактора экспресс-методом с помощью универсального реагента антирезус Rh0(D), содержащего неполные поликлональные IgG анти-D антитела, в пробирке без подогрева. Публикуем подробное руководство по постановке реакции конглютинации с желатином с применением стандартного реагента Rh0(D) или цоликлона Анти-D. Доказываем преимущества использования цоликлонов Анти-D-супер и Анти-D по сравнению с универсальным реагентом.
В состав стандартного универсального реагента антирезус Rh0(D) входят поликлональные неполные IgG анти-D антитела. Для подтверждения достоверности определения резус-фактора крови донора экспресс-методом необходимо провести проверку контрольных образцов стандартных резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов. При проведении контрольного исследования используйте тест-эритроциты Rh+ группы 0 или совпадающей по системе AB0 группы и одногруппные по AB0 тест-эритроциты Rh-.
Методика постановки реакции в пробирке без подогрева
1. Внесите на дно пробирки одну каплю реагента антирезус Rh0(D).
2. Добавьте к содержимому пробирки одну каплю анализируемых эритроцитов.
3. Встряхните пробирку для перемешивания жидкостей.
4. Наклоните пробирку практически до горизонтального положения и с небольшой скоростью поворачивайте вокруг вертикальной оси не менее трех минут. Рассредоточение эритроцитов по стенкам способствует более выраженным результатам реакции.
5. Добавьте 2 – 3 мл изотонического раствора NaCl и 2 – 3 раза переверните пробирку без взбалтывания. Хлорид натрия исключает проявление неспецифической агглютинации.
6. Оцените результат реакции визуально. Выраженные агглютинаты на фоне прозрачной жидкости говорят о наличии антигена D, равномерно окрашенная жидкость без агрегации эритроцитов – свидетельство резус-отрицательной крови.
Постановка реакции конглютинации с желатином
Реакция проходит с использованием стандартного реагента антирезус Rh0(D) или цоликлона Анти-D.
1. Внесите в пробирку приблизительно 0,05 мл (одну каплю) анализируемой крови или 50 % взвеси эритроцитов в сыворотке.
2. Подогрейте 10 % раствор желатина до жидкого состояния.
3. Добавьте к исследуемому образцу крови 0,1 мл (две капли) желатина.
4. Внесите 0,1 мл (две капли) реагента антирезус Rh0(D) или цоликлона Анти-D.
5. Перемешайте содержимое.
6. Подогрейте пробирку в водяной бане при 37 °C в течение 10 минут.
7. Долейте 5 – 8 мл раствора NaCl.
8. Перемешайте жидкости, осторожно перевернув пробирку 1 – 2 раза.
9. Проведите оценку результата реакции невооруженным глазом, допускается использование лупы.
Явно выраженные агрегаты различного размера на фоне прозрачного раствора свидетельствуют об обнаружении антигена D, равномерно окрашенная жидкость без наличия агглютинатов – признак отсутствия агглютиногена.
10. Подтвердите достоверность исследования контрольным определением.
При неадекватных результатах контрольного исследования повторите определение резус-фактора экспресс-методом с заменой типирующего реагента и/или желатина. В случае мелкозернистой агглютинации проведите дополнительное исследование эритроцитов в непрямой реакции Кумбса.
Сравнение различных методов определения резус-фактора
При проведении сравнения анализировали 3778 образцов крови доноров. При первичном определении выявили 418 (11,1 %) резус-отрицательных образцов, из которых на втором этапе исследования 42 (1,1 %) образца отнесли к резус-положительным ввиду обнаружения фенотипа D-C+.
При сравнении анализа на наличие антигена D с использованием Анти-D-супер и Rh0(D) выявили значительные преимущества применения цоликлона Анти-D-супер: высокую скорость наступления реакции, выраженный характер агглютинации, возможность проведения исследования на плоскости. Результаты сравнения методов приведены в Таблице № 1.
Таблица № 1. Сравнения результатов типирования крови доноров с помощью цоликлона Анти-D-супер и универсального реагента антирезус Rh0(D).
| Параметр сравнения | Цоликлон Анти-D-супер | Универсальный реагент антирезус Rh0(D) |
|---|---|---|
| Скорость реакции | 8 – 10 секунд | 3 – 4 минуты |
| Выраженность агглютинации (от + до ++++) | ++++ | +++ и ++++ |
| Специфичность | да | да |
